M-MLV One-Step RT-qPCR(Probe) Kit
【试剂盒组成】
组分 | MT701-01 (20 μl×100 rxns) |
2 ×One-Step RT-qPCR Buffer | 1 ml |
Taq HS(5U/μl) | 40 μl |
RT Enzyme Mix | 40 μl |
H2O(RNase free) | 1 ml |
【贮藏及有效期】 试剂盒-20℃以下冷冻避光保存，有效期为 12 个月
【产品简介】
采用了探针法 (TaqMan) 一步RT-qPCR 方案。反转录与qPCR 反应在同一反应体系中连续进行，反应中不需添加任何试剂，操作简 单，并能有效防止污染。RT Enzyme Mix含有反转录酶与RNA酶抑制剂，Taq HS(5U/μl)为抗体修饰的Taq酶，具有热启动，检测精确度更高，灵敏度更高的特点。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对多种丰度的靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。
【产品特点】
1.RT Enzyme Mix含有反转录酶与RNA酶抑制剂，可对微量RNA进行反转录。
2.qPCR使用了Taq HS(5U/μl)，可以进行热启动法PCR反应，与产品Buffer系统结合，具有扩增效率高，灵敏度高的特点。
3.只能使用特异引物，不能使用Oligo(dT)和Random Primer。
【使用方法】
配制反应体系
成分 | 体积 | 终浓度 |
2×One-Step RT-qPCR Buffer | 10 μl | 1 × |
Taq HS(5U/μl) | 0.4 μl | |
RT Enzyme Mix | 0.4 μl | |
PCR Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 0.2 μM *1 |
PCR Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μl | 0.2 μM *1 |
Probe | 0.4 μl*2 | |
RNA模板 | 2 μl*3 | |
H2O(RNase free) | To 20 μl |
*1 通常引物终浓度为 0.2 μM 可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在 0. 1~1.0 μM 范围内调整引物浓度。
*2 探针浓度与使用的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针 的具体使用要求进行。
*3 模板使用量依据具体实验而定，建议RNA 使用量在10 pg- 100 ng。
实验图例
