SUMO Protease

储存温度：

     SUMO Protease(10 U/μl)长期储存于-80℃，可保存2年；或小量分装后保存于-20℃，可保存6个月，避免反复冻融。10×SUMO Buffer+/-Salt置于-20°C保存即可。

产品介绍：

SUMO Protease也称Ulp，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶，它能识别 SUMO蛋白的三级结构，而不是氨基酸序列，因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。切割的最佳温度为30°C，该酶作用温度（4-30℃）和PH范围（pH7-9）都比较广泛。SUMO Protease是自大肠杆菌表达经亲和纯化的重组蛋白酶。 SUMO Protease带有多聚组氨酸标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。

酶活性单位定义：

在1×SUMO Buffer -Salt(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% NP-40, 1 mM DTT)中，30°C反应1h，剪切>85％的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

应用：融合蛋白标签剪切去除。

操作方法：

  若蛋白为热不稳定性，请在4°C孵育较长时间或增加酶的用量。

      1. 在EP管中配置如下反应体系：

      2.混匀上述体系后于30℃孵育，在 1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液，置于单独的EP管中。

      3. 向上述EP管中加入20 μl 2×SDS Loading Buffer, 置于-20°C。

      4. 取30 μl样品进行SDA-PAGE分析。

注意事项：

1. 10× SUMO Buffer +Salt(500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Igepal (NP-40), 1.5 M NaCl, 10 mM DTT); 10× SUMO Buffer -Salt(500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Igepal (NP-40), 10 mM DTT)请根据实验选择合适的缓冲液。

2. 为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶所需NaCl的浓度不同的蛋白情况会有所差别，可根据实际情况在0～300 mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。