DNA纯化回收常见问题分析

1、DNA产量低或者纯度不高

原因分析：漂洗液中没有加无水乙醇

建议解决方法：第一次实验时，在漂洗液中加入指定量的无水乙醇。

原因分析：试剂盒储存在非最佳条件

建议解决方法：试剂盒存放在室温（15℃-20℃）。

原因分析|：使用了非最佳的洗脱液

建议解决方法：使用本试剂盒配套的洗脱液。

原因分析：试剂和回收液没有充分混匀

建议解决方法：加入每个试剂后都要充分混匀。

原因分析：使用的结合液不足

建议解决方法：确保回收液体积和结合液的比例是1：5。

原因分析：洗脱不完全

建议解决方法：使用2次洗脱缓冲液洗脱，合并两次洗脱液。

原因分析：起始的处理材料中DNA含量太低

建议解决方法：加大处理量，但注意不要少于30ul。

原因分析：回收的片段小于100bp或者大于10kb

建议解决方法：片段小于100bp或者大于10kb回收效率都会迅速降低，可尝试提高起始处理量。

2、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全

原因分析：缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下

建议解决方法：储存在室温（15℃-20℃）。每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发、pH改变和污染。

原因分析：乙醇抑制了酶切反应

建议解决方法：尽量除去漂洗液，空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。

3、洗脱液中不含DNA

原因分析：一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应

建议解决方法：将洗脱的DNA溶液13000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。

原因分析：在初始处理材料中没有PCR产物

建议解决方法：开始回收前，用琼脂糖凝胶/EB电泳检测PCR产物。

如果您还有其他技术疑问，欢迎随时拨打技术热线：010-52609502转8007；也可把您的技术问题发送到技术部邮箱：biomedsupport@163.com。