蛋白定量
SUMO Protease
发布者:博迈德生物发布时间:2019-09-055353
储存温度:
SUMO Protease(10 U/μl)长期储存于-80℃,可保存2年;或小量分装后保存于-20℃,可保存6个月,避免反复冻融。10×SUMO Buffer+/-Salt置于-20°C保存即可。
产品介绍:
SUMO Protease也称Ulp,是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶,它能识别 SUMO蛋白的三级结构,而不是氨基酸序列,因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。切割的最佳温度为30°C,该酶作用温度(4-30℃)和PH范围(pH7-9)都比较广泛。SUMO Protease是自大肠杆菌表达经亲和纯化的重组蛋白酶。 SUMO Protease带有多聚组氨酸标签,便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。
酶活性单位定义:
在1×SUMO Buffer -Salt(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% NP-40, 1 mM DTT)中,30°C反应1h,剪切>85%的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
应用:融合蛋白标签剪切去除。
操作方法:
若蛋白为热不稳定性,请在4°C孵育较长时间或增加酶的用量。
1. 在EP管中配置如下反应体系:
2.混匀上述体系后于30℃孵育,在 1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液,置于单独的EP管中。
3. 向上述EP管中加入20 μl 2×SDS Loading Buffer, 置于-20°C。
4. 取30 μl样品进行SDA-PAGE分析。
注意事项:
1. 10× SUMO Buffer +Salt(500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Igepal (NP-40), 1.5 M NaCl, 10 mM DTT); 10× SUMO Buffer -Salt(500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Igepal (NP-40), 10 mM DTT)请根据实验选择合适的缓冲液。
2. 为达到最好的酶切效果,请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白,SUMO蛋白酶所需NaCl的浓度不同的蛋白情况会有所差别,可根据实际情况在0~300 mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。
- •NEB5αF´ Iq 感受态细胞 ...
- •Lipo3000 Transfection Reagent...
- •Lipo2000 Transfection Reagent...
- •12% 彩色(绿色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •10% 彩色(蓝色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •8% 彩色(红色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •UVFS 蛋白凝胶染色剂...
- •10-250KD (+40KD) Prestained Protein Ladder...
- •10-180KD Prestained Protein Ladder...
- •小鼠基因型快速鉴定试剂盒...
- •氯仿替代物...
- •Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)...
- •T4 gene 32 protein (gp 32)...
- •T4 UvsY Recombinase (T4重组酶辅助蛋白)...
- •T4 UvsX Recombinase (T4重组酶)...
- •NEB5αF´ Iq 感受态细胞 ...
- •Lipo3000 Transfection Reagent...
- •Lipo2000 Transfection Reagent...
- •15% 彩色(紫色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •12% 彩色(绿色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •10% 彩色(蓝色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •8% 彩色(红色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •UVFS 蛋白凝胶染色剂...
- •10-250KD (+40KD) Prestained Protein Ladder...
- •10-180KD Prestained Protein Ladder...
- •小鼠基因型快速鉴定试剂盒...
- •氯仿替代物...
- •Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)...
- •T4 gene 32 protein (gp 32)...
- •T4 UvsY Recombinase (T4重组酶辅助蛋白)...