重组克隆
pPIC9K Seamless Cloning Kit
发布者:博迈德生物发布时间:2021-05-1318530
保存条件:-20℃保存
产品介绍:
pPIC9K为毕赤酵母表达载体,载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。 pPIC9载体大小9276 bp,是融合表达载体,利用alpha因子分泌信号肽,分泌表达蛋白基因。在毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。在载体构建过程中,目的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。本产品提供pPIC9K经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。
无缝克隆技术可在重组酶的作用下,只需一步反应,便可将片段克隆到任何载体中的任意位置,得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术,具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点,用于单个DNA片段的克隆,多个DNA片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
产品特点:
1. pPIC9K为毕赤酵母表达载体,载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。
2. pPIC9载体利用alpha因子分泌信号肽,分泌表达蛋白基因。
3. 在毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
4. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。
5. 可以克隆长片段和多片段DNA。
操作步骤:
1. pPIC9K线性化载体使用方法:
(1) pPIC9K线性化载体当做克隆载体使用,可以在扩增PCR产物的
上游引物 5’端添加序列:GAGAGGCTGAAGCTTACGTAGAATTC
下游引物 5’端添加序列:GCGAATTAATTCGCGGCCGC
通过无缝克隆连接到pPIC9K中。
(2) 测序引物
AOX1-F:GACTGGTTCCAATTGACAAGC
或alpha-Factor-F:TACTATTGCCAGCATTGCTGC
AOX1-R:GCAAATGGCATTCTGACATCC
(3) pPIC9K线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体,图谱及多克隆位点见下图。
详情见说明书
- •NEB5αF´ Iq 感受态细胞 ...
- •Lipo3000 Transfection Reagent...
- •Lipo2000 Transfection Reagent...
- •12% 彩色(绿色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •10% 彩色(蓝色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •8% 彩色(红色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •UVFS 蛋白凝胶染色剂...
- •10-250KD (+40KD) Prestained Protein Ladder...
- •10-180KD Prestained Protein Ladder...
- •小鼠基因型快速鉴定试剂盒...
- •氯仿替代物...
- •Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)...
- •T4 gene 32 protein (gp 32)...
- •T4 UvsY Recombinase (T4重组酶辅助蛋白)...
- •T4 UvsX Recombinase (T4重组酶)...
- •NEB5αF´ Iq 感受态细胞 ...
- •Lipo3000 Transfection Reagent...
- •Lipo2000 Transfection Reagent...
- •15% 彩色(紫色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •12% 彩色(绿色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •10% 彩色(蓝色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •8% 彩色(红色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •UVFS 蛋白凝胶染色剂...
- •10-250KD (+40KD) Prestained Protein Ladder...
- •10-180KD Prestained Protein Ladder...
- •小鼠基因型快速鉴定试剂盒...
- •氯仿替代物...
- •Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)...
- •T4 gene 32 protein (gp 32)...
- •T4 UvsY Recombinase (T4重组酶辅助蛋白)...