重组克隆
pET-28a(+) Seamless Cloning Kit
发布者:博迈德生物发布时间:2021-05-1318149
产品介绍:
pET-28a(+)载体为高水平的原核表达载体,在N端含有His-Tag, Thrombin(凝血酶)酶切位点,T7-Tag,在C端具有His-Tag。本产品提供pET-28a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。
无缝克隆技术可在重组酶的作用下,只需一步反应,便可将片段克隆到任何载体中的任意位置,得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术,具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点,用于单个 DNA 片段的克隆,多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
产品特点:
1. pET-28a载体为原核表达载体,具有N-His, N-Thrombin, N-T7和C-His。
2. pET-28a经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,省时省力。
3. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。
4. 可以克隆长片段和多片段DNA。
5. 简单、快速、精确、定向克隆。
操作步骤:
1. pET-28a(+)线性化载体使用方法:
(1) pET-28a(+)线性化载体当做克隆载体使用,可以在扩增PCR产物的
上游引物 5’端添加序列:GCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATG(需要5’端HIS标签时)
或者AACTTTAAGAAGGAGATATACCATG(不需要5’端HIS标签时)
下游引物 5’端添加序列:CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG(需要3’端HIS标签时)
或者CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGTCA(不需要3’端HIS标签时)
通过无缝克隆连接到pET-28a(+)中。
(1) 测序引物
T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
(2)
pET-28a(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体,图谱及多克隆位点见下图。
- •NEB5αF´ Iq 感受态细胞 ...
- •Lipo3000 Transfection Reagent...
- •Lipo2000 Transfection Reagent...
- •12% 彩色(绿色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •10% 彩色(蓝色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •8% 彩色(红色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •UVFS 蛋白凝胶染色剂...
- •10-250KD (+40KD) Prestained Protein Ladder...
- •10-180KD Prestained Protein Ladder...
- •小鼠基因型快速鉴定试剂盒...
- •氯仿替代物...
- •Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)...
- •T4 gene 32 protein (gp 32)...
- •T4 UvsY Recombinase (T4重组酶辅助蛋白)...
- •T4 UvsX Recombinase (T4重组酶)...
- •NEB5αF´ Iq 感受态细胞 ...
- •Lipo3000 Transfection Reagent...
- •Lipo2000 Transfection Reagent...
- •15% 彩色(紫色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •12% 彩色(绿色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •10% 彩色(蓝色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •8% 彩色(红色)免染PAGE胶一步法快速制备试剂盒...
- •UVFS 蛋白凝胶染色剂...
- •10-250KD (+40KD) Prestained Protein Ladder...
- •10-180KD Prestained Protein Ladder...
- •小鼠基因型快速鉴定试剂盒...
- •氯仿替代物...
- •Bsu DNA Polymerase (Large Fragment)...
- •T4 gene 32 protein (gp 32)...
- •T4 UvsY Recombinase (T4重组酶辅助蛋白)...