农杆菌

NUCLEIC ACID PURIFICATION

LBA4404 农杆菌感受态细胞

发布者:博迈德生物发布时间:2018-01-31222

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BC301-01 LBA4404 农杆菌感受态细胞 20×100μl 420


产品介绍:

   LBA4404菌株为Ach5型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因Rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。

 pAL4404Ti质粒含有筛选标签:Strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作,经植物双元pCAMBIA2301质粒检测,转化效率可达103cfu/μg-70℃保存12个月转化效率不发生改变。

 

基因型:Ach5 (rif R) Ti pAL4404 (StrR) Octopine

 

储存条件:-70保存,避免反复冻融。

 

转化方法 (采用冻融方法)

1.-70℃保存的LBA4404农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化; 

2. 无菌条件下,向感受态细胞中加入100ng质粒DNA,轻轻混匀,冰水浴中静置5分钟;

3.将离心管置于液氮中速冻5分钟;(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)

4.然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟,不要晃动水面;

5.将离心管放回冰水浴中,冰浴5分钟; 

6.无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYTLB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时,菌体复苏;

7.6000rpm离心1分钟收菌,留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,取适量菌液,涂布于相应抗生素的LB平板上,于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。

 

(具体操作详见说明书)