蛋白定量

NUCLEIC ACID PURIFICATION

【新品】SUMO Protease

发布者:博迈德生物发布时间:2019-09-05195

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PA130-01 【新品】SUMO Protease 1000U 998
PA130-02 1000U×5 4490

温度:

     SUMO Protease(10 U/μl)长期储存于-80,可保存2年;或小量分装后保存于-20,可保存6个月,避免反复冻融。10×SUMO Buffer+/-Salt置于-20°C保存即可。


产品介绍:

SUMO Protease也称Ulp,是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶,它能识别 SUMO蛋白的三级结构而不是氨基酸序列,因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。切割的最佳温度为30°C,该酶作用温度4-30℃)PH范围(pH7-9)都比较广泛。SUMO Protease是自大肠杆菌表达经亲和纯化的重组蛋白酶。 SUMO Protease带有多聚组氨酸标签,便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。


酶活性单位定义:

1×SUMO Buffer -Salt(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% NP-40, 1 mM DTT)中,30°C反应1h,剪切>85%的2 μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。


应用:融合蛋白标签剪切去除。


操作方法

  若蛋白为热不稳定性,请在4°C孵育较长时间或增加酶的用量。

      1. EP管中配置如下反应体系:

130.png

      2.混匀上述体系后于30℃孵育,在 1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液,置于单独的EP管中。

      3. 向上述EP管中加入20 μl 2×SDS Loading Buffer, 置于-20°C

      4. 30 μl样品进行SDA-PAGE分析。


注意事项

1. 10× SUMO Buffer +Salt(500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Igepal (NP-40), 1.5 M NaCl, 10 mM DTT); 10× SUMO Buffer -Salt(500 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Igepal (NP-40), 10 mM DTT)请根据实验选择合适的缓冲液。

2. 为达到最好的酶切效果,请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白,SUMO蛋白酶所需NaCl的浓度不同的蛋白情况会有所差别,可根据实际情况在0300 mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。