蛋白定量

NUCLEIC ACID PURIFICATION

【新品】TEV Protease

发布者:博迈德生物发布时间:2019-09-05194

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PA131-01 【新品】TEV Protease 1000U 998
PA131-02 1000U×5 4490

温度:

TEV Protease(10 U/μl)长期储存于-80℃,可保存2年;或小量分装后保存于-20℃,可保存6个月,避免反复冻融。10×TEV Buffer置于-20℃保存即可。

产品介绍:

TEV Protease (烟草蚀纹病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease) 是来源于烟草蚀纹病毒(TEV) Nla的重组蛋白酶,此蛋白酶被用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签。TEV Protease具有很强的位点特异性,能够识别EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu- Tyr-Phe- Gln-Gly),最普通的是ENLYFQG,其切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。该酶在PH 5.5-8.5和4-30℃的广泛范围内皆有活性,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而修改。TEV Protease自大肠杆菌表达经亲和纯化的重组蛋白酶。TEV Protease带有多聚组氨酸标签,酶切反应完毕后可通过亲和层析去除。

酶活性单位定义:

1×TEV Buffer (50 mM Tris-HCl, pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1 mM DTT) 中,30℃条件下反应1 h,能够切割3 µg的反应底物达85%以上所需的酶量定义为一个活性单位。

应用:融合蛋白标签剪切去除。

操作方法 

  若蛋白为热不稳定性,请在4℃孵育较长时间或增加酶的用量。

  1. EP 管中配置如下反应体系:

QQ截图20190927095029.png

  2.混匀上述体系后于30℃孵育,在 1、2、4、6小时分别吸出30 μl上述反应液,置于单独的EP管中。

  3.向上述EP管中加入20 μl 2×SDS Loading Buffer, 置于-20℃

  4.30 μl样品进行SDA-PAGE分析。

注意事项

为达到最好的酶切效果,请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。