农杆菌

NUCLEIC ACID PURIFICATION

【新品】GV3101(pSoup)农杆菌感受态细胞

发布者:博迈德生物发布时间:2019-09-11159

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BC314-01 【新品】GV3101(pSoup)农杆菌感受态细胞 20×100μl 420


产品介绍:


农杆菌GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有利福平抗性筛选基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移),质粒为庆大霉素抗性。一些缺失农杆菌复制相关元件(如pVS1的复制起点REP区或pVS1质粒的STA区)的表达质粒如pGreenpGreenII-62SKpGs2等不能在GV3101菌株中繁殖。辅助质粒pSoup可以帮助这些不完整双元表达质粒在农杆菌中的复制并使GV3101(pSoup)菌株具有四环素(Tet)抗性。该菌株适用于拟南芥、烟草、玉米和土豆等植物的转基因操作。GV3101(pSoup)农杆菌感受态细胞经特殊工艺制备,经pGs2质粒检测,转化效率可达103cfu/μg-70℃保存12个月转化效率不发生改变。

 

转化方法(采用冻融方法)


1. -70℃保存的GV3101(pSoup)农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化;

2. 无菌条件下,向感受态细胞中加入100ng-1μg质粒DNA(第一次使用,最好做一下预实验,确定所加质粒的最佳量),轻轻混匀,冰水浴中静置5 分钟;

3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟;(注:可用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)

4. 然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟,不要晃动水面;

5. 将离心管放回冰水浴中,冰浴5分钟;

6. 无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYTSOBSOCLB液体培养基,于28℃振荡培养2-3小时,菌体复苏;

7. 6000rpm离心1分钟收菌,留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,取适量菌液,涂布于相应抗生素的LB平板上,于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。(实验表明当平板只含有50μg/mlKan时,28℃培养48 h即可看到菌落;平板中含有50 μg/ml Kan20 μg/ml Rif 时,需28℃培养60 h可看到菌落;如果平板中含有50 μg/ml Kan50 μg/ml Rif时则需要28℃培养72-90 h可看到菌落