大肠杆菌

NUCLEIC ACID PURIFICATION

【新品】dam-/dcm-感受态细胞

发布者:博迈德生物发布时间:2019-12-243818

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BC122-01 【新品】dam-/dcm-感受态细胞 20×100ul 420

储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

产品介绍:

本公司生产的dam-/dcm-感受态细胞是采用大肠杆菌dam-/dcm-菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株,该菌株为damdcm甲基化酶失活突变型菌株,常用于质粒DNA的去damdcm甲基化处理,消除damdcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变,不建议连接产物的转化实验,仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。pUC19质粒检测转化效率>×106 cfu/μg DNA

基因型ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetS endA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

菌株抗性:对氯霉素、链霉素有抗性;对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟,不要晃动。

3.42℃热击60秒钟,不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟,不要晃动。

5.加入500μl的室温SOCLB培养基。

6.置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

7.50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养12-18小时。

 

平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。)

 

质粒快速转化步骤:将步骤2的时间缩短到5分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤4完成后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。)