产品问题分析

产品问题分析

DNA纯化回收常见问题分析

发布者:博迈德生物2018-06-192409

1、DNA产量低或者纯度不高

原因分析:漂洗液中没有加无水乙醇

建议解决方法:第一次实验时,在漂洗液中加入指定量的无水乙醇。

原因分析:试剂盒储存在非最佳条件

建议解决方法:试剂盒存放在室温(15℃-20℃)。

原因分析|:使用了非最佳的洗脱液

建议解决方法:使用本试剂盒配套的洗脱液。

原因分析:试剂和回收液没有充分混匀

建议解决方法:加入每个试剂后都要充分混匀。

原因分析:使用的结合液不足

建议解决方法:确保回收液体积和结合液的比例是1:5。

原因分析:洗脱不完全

建议解决方法:使用2次洗脱缓冲液洗脱,合并两次洗脱液。

原因分析:起始的处理材料中DNA含量太低

建议解决方法:加大处理量,但注意不要少于30ul。

原因分析:回收的片段小于100bp或者大于10kb

建议解决方法:片段小于100bp或者大于10kb回收效率都会迅速降低,可尝试提高起始处理量。


2、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全

原因分析:缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下

建议解决方法:储存在室温(15℃-20℃)。每次用完后立刻盖紧盖子,以免溶液蒸发、pH改变和污染。

原因分析:乙醇抑制了酶切反应

建议解决方法:尽量除去漂洗液,空气中晾几分钟,让残留乙醇挥发。


3、洗脱液中不含DNA

原因分析:一些硅基质膜成分一起洗脱下来,抑制了酶切反应

建议解决方法:将洗脱的DNA溶液13000rpm再离心一分钟,小心取上清使用。

原因分析:在初始处理材料中没有PCR产物

建议解决方法:开始回收前,用琼脂糖凝胶/EB电泳检测PCR产物。


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