博迈德公司新品来袭！Ni-IDA琼脂糖磁珠，一起来了解一下！

产品信息：

产品介绍：

Ni-IDA琼脂糖磁珠可用于简单、快速地小量提取组氨酸标签蛋白。磁珠与表达组氨酸标签蛋白的细胞裂解液混合，使用磁分离方法，通过结合、洗涤和洗脱等步骤就可以纯化出目的蛋白。与传统层析方式使用的金属螯合琼脂糖柱材相比，采用磁珠纯化组氨酸标签蛋白，无需控制流速。无需昂贵的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤以及目标蛋白的洗脱变得简单、快速、易操作。在一小时内便能获得高纯度的目标蛋白，且能轻松实现高通量和大规模样品的平行处理。

自备器材和试剂：磁力架，带组氨酸标签的重组蛋白，缓冲液，摇床或旋转混合仪。

适用范围：用于纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等系统表达的可溶性组氨酸标签蛋白，也可用于变性蛋白的纯化（包涵体蛋白需在变性条件下进行）。

利用Ni-IDA琼脂糖磁珠纯化的红色和绿色荧光蛋白

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红色荧光蛋白（白光透射灯下拍摄）

绿色荧光蛋白（紫外光激发明场条件下拍摄/黑暗条件下拍摄)

操作步骤：

这个方法可以纯化0.5mg左右的可溶性组氨酸标签蛋白，如果需要大量纯化，需按比例调整磁珠和溶液的使用量。最后洗脱得到的蛋白量与每种蛋白的大小和表达量有关。

1.将装有磁珠的试剂瓶充分混匀。吸取100μl混匀好的磁珠到一个1.5ml的离心管中。

2.加入400μl的 Binding Buffer，颠倒混匀10秒钟。

3.将离心管置于磁力架上，静止10秒钟，然后转动一下离心管，静止30秒钟，磁珠都被吸附到磁铁的一侧，小心吸掉上清。

4.加入500μl的Binding Buffer, 颠倒混匀10秒钟. 将离心管置于磁力架上，静止10秒钟，然后转动一下离心管，静止30秒钟，磁珠都被吸附到磁铁的一侧，小心吸掉上清。

5.将500μl离心处理好的含组氨酸标签蛋白的样本和500μl Binding Buffer等体积混匀（留50ul样本用于SDS-PAGE分析）。

6.将第5步中准备好的样本加入到含有清洗好珠子的1.5 ml离心管中。颠倒混匀，在摇床上晃动20-30分钟。

7.将离心管置于磁力架上，收集磁珠，小心倒掉上清。（如有必要可以保留上清，此为流穿样品，用于SDS-PAGE分析。）

8.加入500μl的Wash Buffer,颠倒混匀10秒钟。用磁力架收集磁珠。倒掉上清。（如有必要可以保留上清，此为洗涤样本，用于SDS-PAGE分析。）

9.加入500μl的Wash Buffer。重复步骤8。

10.加入100μl的Elution Buffer。室温放置2分钟洗脱蛋白。

11.用磁力架收集磁珠。小心吸取液体，此液体中含有纯化好的目的表达蛋白。

12.可加入100μl的Elution Buffer。重复步骤10-11，再次收集从磁珠上洗脱下来的目的蛋白。

13.用SDS-PAGE方法对样本进行蛋白纯度分析，用Bradford或BCA等蛋白定量试剂盒测定蛋白的浓度。

RFP六步纯化步骤图