大肠杆菌

NUCLEIC ACID PURIFICATION

Stable 感受态细胞

发布者:博迈德生物发布时间:2018-09-182756

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BC118-01 Stable 感受态细胞 20×100μl 420


产品信息:

组成

BC118-01

Stable Competent cells

20×100ml

pUC190.1ng/µl

5ml


储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。



产品介绍:


本公司生产的Stable感受态细胞是采用Stable菌株经特殊工艺制备得到的感受态细胞。Stable菌株特别适用于具有末端重复序列的逆转录病毒或慢病毒质粒的构建和扩增,也适用于重复DNA序列的克隆和扩增。Stable具有与Stbl3和Stbl4完全不同的基因型,比Stbl3和Stbl4生长速度更快,性能更好。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。ΔlacZM15基因的存在可用于蓝白斑筛选。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。Stable感受态细胞经pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。



基因型:


F´ proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15


e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)




菌株抗性:对氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素和呋喃妥因敏感。具有四环素和链霉素抗性。




质粒转化步骤:


1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA或5-10μl连接产物到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。


2.冰水浴中放置30分钟,不要晃动。


3.42℃热击60秒钟,不要晃动。


4.冰水浴中放置2分钟,不要晃动。


5.加入500μl的室温的SOC或LB培养基。


6.置于37℃摇床中,150-200rpm震荡复苏培养60分钟。


7.取50-100μl菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板,37℃培养12-18小时。



(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化,连接产物转化最好用涂布法。)


(质粒快速转化步骤:将步骤2的时间缩短到5分钟,对于氨苄青霉素抗性的质粒,步骤4完成后,可直接涂布或划线于含氨苄青霉素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。)