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·DNA常规测序

样品提供说明及注意事项

发布者:博迈德生物2018-01-183826


订单填写细则

   1. 客户信息

      测序订单上登记的客户信息是最原始资料,所有的测序工作都将依此订单开展,所以务必详细、准确、完整填写。

      注意:每次订单都需要填写完整客户信息:姓名,单位,邮箱,电话等。

      邮箱建议使用163.com/126.com/188.com等邮箱,填写时请使用大写字母。

      请尽量填写手机号,方便能及时联系上客户。


   2. 样品信息

     ①确保样品管上的编号和登记表上样品编号一致,以免使样品混淆。同时注意样品编号不要超过8个字节,并不能出现汉字及特殊字符等(仪器不识别)。

     ②必须确认单个样品反应数及样品反应总数,以免出现多测或漏测现象,造成疑问或不必要的纠纷。

     ③需要测通或单向测通的可以在表上注明,要求测通的可以直接安排测通,节约客户的测序时间。但注意:注明测通的公司将直接安排实验,不再与客户确认,所以有任何问题必须提前通知公司。

     ④菌液和质粒测序一定要写明正确载体名称和引物名称,以便公司工作人员正确测序和核对客户的测序疑问。

     ⑤如果是公司没有的通用引物,请提供合适的引物测序。如客户没有引物也可以提供电子版的载体图谱和序列(标明酶切位点和测序方向),公司可帮助设计引物后再安排测序。特别需要注意的是载体名称一定写全,以免用错引物。如:只写T载体,而PGEM-T和PMD18-T这两种T载体的引物是不能共用。还有PMD18-T、PΜC18(118)、PΜC19(119)等系列载体测序引物不要写正向(+,M13+,M13F)或反向(-,M13-,M13R),要注明M13F(-47)或M13R(-48),因为这类载体较特别。

     ⑥菌液测序请注意抗生素(我们备氨苄青霉素,卡那霉素)和培养基类型(我们备LB),如是公司没有的,请客户自己提供5ML新鲜菌液或质粒测序。

     ⑦有特殊结构的样品(如:拷贝数低、GC rich、有poly结构、发夹结构、重复序列、复杂结构等)一定要在表上注明。这样在安排实验时公司可以有针对的改变实验条件,提高这部分样品的成功率。


样品要求

    菌液、平板菌和甘油菌模板要求

    1. 注明载体的抗性,我们提供Amp和kan两种抗生素;特殊抗生素请自备,并标明使用浓度。

    2. 应为高拷贝质粒,低拷贝质粒最好请直接提供3μg左右的质粒;如果送菌液,请特别注明。

    3. 提供500µl-1ml的过夜培养的新鲜菌液,装于1.5ml离心管中封口保存,防止交叉污染或泄漏。

    4. 请提供新鲜的平板菌(克隆大小适中,能方便地挑取单克隆菌株)。

    5. 尽量不要提供甘油菌,请活化后再送新鲜菌液。

    6. 大量样品测序:建议在96空板或者Eppendorf管中用牙签穿刺培养

    注意:关于噬菌体,绝对不收菌液,只收抽提好的质粒,请一定要注意; 质粒(除特殊样品,一般不建议客户提供质粒)。


    质粒DNA的测序

    ØSample形态为提纯质粒时

    1. 请注明载体名称及结构情况、插入片段的长度及插入片段的酶切位点等情况,请提供1μg以上提纯的质粒DNA(浓度大于50ng/μl)。

    2. 如果提供质粒偏少需要公司转化时,收取质粒转化费用。

    3. 建议用双蒸水溶解,请勿使用Tris-EDTA(TE)缓冲液。

    特别注意:如是客户自构建载体,需要自行提供测序引物,如客户没有引物,则需要将载体的电子版序列提供给我们,并标明其插入片段的位置,由我公司免费设计引物,经客户确认后由我公司进行合成后用于测序。(注,合成引物需按照市场价格收取合成费用)。


    PCR产物直接测序

    ØSample形态为纯化后的PCR产物时

    1. PCR产物务必溶于双蒸水,浓度要求至少50ng/μl,量至少20μl以,浓度大于50ng/μl,并注明片段长度,长片段需适当增加量,便于核对样品测序是否有问题,同时方便安排需要测通的样品测序和拼接工作。

    2. 若客户要长期测序请您加大PCR纯化产物的量。

    3. 客户回收的PCR产物务必为单一条带,否则将无法测序或影响测序结果。


    ØSample形态为未纯化的PCR产物时

    1. 要求片断长度大于100bp小于2kb,如大于2kb最好建议客户克隆后测序,浓度要求至少50ng/μl,量至少50μl,并注明片段长度,便于核对样品测序是否有问题,同时方便安排需要测通的样品测序和拼接工作。

    2. 建议客户送PCR未纯化产物是电泳可见的单一明亮的特异性条带。

    3. 核对所送样品是否有渗漏现象,如有,建议客户重新送样。


服务说明

    1. 由于自带引物问题或样品本身原因(如复杂结构,高级结构等)造成测序失败照常收费,非样品原因造成测序失败免费。

    2. 对于选择E-Mail发送报告的,如对结果有异议,请在接到报告后3天内电话联系我公司,未联系的则认为您接受结果与费用。

    3. 所送样品及引物,我们将免费保存一个月,超过一个月后如客户无特殊要求,样品自动被销毁。

    4. 若临时变更测序,请尽快电话联系我们,E-Mail通知无效,对于通知前已经安排的反应,照常收费。


自备引物要求

    1. 引物必须经过PAGE纯化方可测序,浓度要求不低于5pmol/μl(或5μmol/L),体积大于10μl(干粉也可,务必标明OD值)。

    2. 请提供引物全序列、PCR退火温度,以供参考(引物长度18-22bp为宜),同时标明引物序列,以便帮助您更好地分析测序结果。

    3. 随机引物、标记引物和简并引物不能用于测序。


样品与引物的保存

    客户提供的样品没有特殊情况公司保留一个月,引物没有特殊情况公司保留一个月,超过期限将全部处理。如果客户要用超过一个月的样品或一个月引物测序请客户重新提供样品和引物。