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BC302-01 | AGL1 农杆菌感受态细胞 | 20×100μl | 420 |
产品介绍:
AGL1菌株为C58, RecA型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因Rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pTiBo542DT-DNA型Ti质粒含有筛选标签:Strep,赋予AGL1菌株链霉素抗性,适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作,经植物双元pCAMBIA2301表达质粒检测,转化效率可达103cfu/μg,-70℃保存12个月转化效率不发生改变。
基因型:C58RecA (rif R/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA (strepR) Succinamopine
储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。
转化方法 (采用冻融方法)
1. 取-70℃保存的AGL1农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化;
2. 无菌条件下,向感受态细胞中加入100ng质粒DNA,轻轻混匀,冰水浴中静置5分钟;
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟;(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)
4. 然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟,不要晃动水面;
5. 将离心管放回冰水浴中,冰浴5分钟;
6. 无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYT或LB液体培养基,于28℃振荡培养2-3小时,菌体复苏;
7. 6000rpm离心1分钟收菌,留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,取适量菌液,涂布于相应抗生素的LB平板上,于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。
(具体操作详见说明书)