产品信息:
产品储存:请按产品指示温度保存各成分
产品介绍:
本产品利用无缝克隆技术来实现基因的定点突变,可用于单点突变和多点突变质粒的构建。本产品无需除去甲基化模板质粒,无需PCR扩增出整个质粒,并且引物设计更加简便快速,因此可以更加快速,高效地实现定点突变。
产品特点:
1. 利用2×Xerox PCR Master Mix扩增片段,缩短扩增时间(2-4 kb/min),提高保真性;
2. 引物设计更加简单,快速;
3. 省略消化甲基化模板质粒的步骤,更加快速,高效;
4. 无需PCR扩增出整个质粒,减少载体的突变。
实验原理:
实验步骤:
一、突变位点的引物设计
1. 突变位点引物设计要求 :
(1)在每个突变位点处需设计一对引物,且突变位点在重叠区约中部位置。可以先设计正向引物,然后通过反向互补得到反向引物。
(2)引物的长度通常为30-40个碱基,突变位点两侧的碱基数在15-20个左右,GC%含量在40%-60%为最佳。
(3)避免引物末端为重复序列。
2. 引物设计示例:
(1)单点突变引物设计:如图1
图1
(2)多点突变引物设计:如图2
图2