产品介绍

    大肠杆菌原核表达系统是迄今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统之一，能快速表达不同种属来源的外源基因。通过对需要表达的外源基因的DNA序列密码子优化以及对表达载体、表达菌株、培养条件和诱导时间等各种因素的综合测试，实现外源基因在大肠杆菌内的表达。表达的重组蛋白经纯化后可用于相应的生物学研究。 

服务内容

（一）表达质粒构建

    1. PCR扩增、酶切或全基因合成后得到目标基因。将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上（可提供表达载体pET，pGEX2T，pMAL，pBV220系列）。

    2. 测序验证重组表达质粒的准确性。

      交付内容：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

（二）表达菌株转化及筛选

    1. 将测序准确的表达质粒转化到大肠杆菌基因工程表达菌株中（可供选择的表达菌株有DH5α，M15, BL21 (DE3)，BL21 (DE3) pLys，Rosetta（DE3），OrigamiB(DE3)等）。

    2. 挑选至少5个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件进行表达分析，SDS-PAGE检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。

       交付内容：重组质粒的表达菌株及SDS-PAGE检测报告。

（三）目标蛋白表达及纯化

    1. 对时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，诱导表达目标蛋白。

    2. 培养诱导1L的重组表达菌株，通过亲和，离子交换等层析方法纯化表达的重组蛋白。

    3. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

       交付内容：纯化好的目标蛋白1-2mg及纯化报告。纯度最高可达95%以上。

服务说明

    1. 含有目的基因的表达质粒(质粒量≥0.1μg)。若需要使用本公司以外的表达载体或菌株，需要由客户提供。

    2. 如果没有获得目标蛋白，只收取一定的成本费。如果最终得到的产品未达到合同要求而客户又同意接受该产品，则双方协商本步骤费用。

    3. 因为每个重组蛋白的表达量及纯化得率都不相同，我们最终根据实际情况将给客户提供最少1mg，最多5mg的目标蛋白，所收取的费用是相同的。

    4. 提供的最终产品一般为保存于常规的缓冲液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸钠缓冲液）中蛋白质溶液，并且其中不含有尿素或盐酸胍等变性剂。但由于无法为每个定制的蛋白建立活性检测系统，所以无法保证最终产品的生物学活性，不过我们承诺将会按照最大可能保护其活性的方法来制备目标蛋白。如果客户一定要求目标蛋白活性，我们可以先提供约50μg纯化后样品供客户检测活性。若样品活性不合格，我们不再提供目标蛋白给客户并只收取本步骤费用的30%，而如果样品活性合格，我们将提供合同要求的相同质量的目标蛋白给客户并需要加收本步骤费用的100%。

    5. 客户如果对检测结果有疑问，请在收到实验报告15天内提出异议，过期恕不受理。实验结束后，如果客户在30天内不提出其它要求，我们

将不保存样品。