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CL150-01	pPIC9K Seamless Cloning Kit	20次	1000

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产品介绍： 

pPIC9K为毕赤酵母表达载体，载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。 pPIC9载体大小9276 bp，是融合表达载体，利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。在毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。在载体构建过程中，目的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。本产品提供pPIC9K经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。

无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个DNA片段的克隆，多个DNA片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。

产品特点：

1. pPIC9K为毕赤酵母表达载体，载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。

2. pPIC9载体利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。

3. 在毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。

4. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。

5. 可以克隆长片段和多片段DNA。

操作步骤：

1. pPIC9K线性化载体使用方法：  

(1) pPIC9K线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的

上游引物 5’端添加序列：GAGAGGCTGAAGCTTACGTAGAATTC

下游引物 5’端添加序列：GCGAATTAATTCGCGGCCGC

通过无缝克隆连接到pPIC9K中。

(2) 测序引物

AOX1-F:GACTGGTTCCAATTGACAAGC

或alpha-Factor-F:TACTATTGCCAGCATTGCTGC

AOX1-R:GCAAATGGCATTCTGACATCC

(3) pPIC9K线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。

详情见说明书