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BC127-03	FT-5a 感受态细胞	100ul*100	500

储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。

产品介绍： 

FT-5α是一种兼容快速转化和常规转化的感受态细胞。对于Amp抗性质粒可在10 min快速转化完成，Kan抗性质粒可在30 min快速转化完成，也可用于常规的克隆、蓝白斑筛选等实验。pUC19质粒检测转化效率>×10⁹ cfu/μg DNA。

基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169deoRendA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA 

菌株抗性：对四环素有抗性；对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素敏感。

使用方法：

1. 常规转化流程 

1) 取100 µL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀，冰上静置30 min。

2) 42°C水浴热激60 s，迅速转移至冰浴中，静置2 min(冰上静置过程中不要晃动样品)。

3) 向离心管中加入500 µL不含抗生素的无菌液体培养基（SOB或LB），混匀后37°C，200 rpm复苏60 min。

4) 取适量体积的复苏液均匀涂布到含相应抗生素的LB固体培养基上，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

2. 快速转化流程 

A. Amp抗性质粒

1) 取100 µL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀，冰上静置5 min。

2) 42℃水浴热激60 s，迅速转移至冰浴中，静置2 min(冰上静置过程中不要晃动样品)。

3) 向离心管中加入500 µL不含抗生素的无菌液体培养基（SOB或LB），取适量体积的复苏液均匀涂布到含Amp抗生素固体培养基上，或不加液体培养基直接涂布，37°C培养箱倒置培养过夜。

B. Kan抗性质粒

1) 取100 µL冰上融化的感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀，冰上静置5 min。

2) 42°C水浴热激60 s，迅速转移至冰浴中，静置2 min(冰上静置过程中不要晃动样品)。

3) 向离心管中加入500 µL不含抗生素的无菌液体培养基（SOB或LB），混匀后37°C，200 rpm复苏20 min (复苏时间每增加5 min转化效率提高3~5倍)。

4) 取适量体积的复苏液均匀涂布到含Kan抗生素固体培养基上 ，37°C培养箱倒置培养过夜。

附：Kan抗性的质粒转化必须含有复苏步骤，使Kan抗性基因表达产物积累一定量后，细菌正常生长。

对于连接产物，比如大质粒，长片段，多片段的质粒构建，为了提高效率，建议增加复苏时间或采用常规转化流程。